美研| CMC系列(九) 定量核磁那些事儿：定量核磁应用及其方法验证

2023-12-18

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开篇引言

核磁共振是基于特定原子核（主要为I=1/2的¹H、¹³C、¹⁵N、¹⁹F、³¹P等）在外磁场（1~21 Tesla，1 tesla=10⁴﷽guass）中吸收了与其分裂能级间能量差相对应的射频场能量而产生共振的原理。核磁共振兼具定性分析及定量检测两种优势，广泛应用于化学、食品、药品等领域。

01 定量核磁原理与应用

降钙素原检测核磁技术工艺（Quantitative Nuclear Magnetic，英文缩写QNMR)最主要的是特征描述提取1H-NMR，待测类有机化合物1H-NMR谱上各电磁波峰刚度之比约等于对应性的质子数之比，判定氢的集分值二者摩尔酸度相等，降钙素原检测核磁手段可以划分对应性降钙素原检测法和决对降钙素原检测法。对应性降钙素原检测法是QNMR中最轻松的，实现更2种或2种之内部分特征描述峰的峰占地面来判定含水量；决对降钙素原检测法是以结构的和含水量已知a的类有机化合物为基准，与待测物制出氢氧化钠溶液使用测得，实现更这两种的电磁波集分刚度来判定待测物的含水量，决对降钙素原检测法通过实践手段差异又可以划分内标法、外标法和规范加如法。参考值核磁高技术在药理学行业的APP有以内领域：

▲反应过程监测
▲对照品赋值
▲原料药含量测定
▲东盟体育制剂的含量测定
▲东盟体育的杂质检查
▲化合物纯度检查
▲多组分纯度确定
▲代谢组学研究
▲聚合物组成研究等。

定量核磁原理与应用.jpg

02 药典法规要求

2010版中药典二部附表中本次提过核磁嗡嗡声波谱法，2020版换成四部通则0441核磁嗡嗡声波谱法。USP现行政策版、EP 10.8版、JP第28版和中药典今年版的NMR法通则游戏内容比照如下所述表如图是。中药典今年版0441通则具有工作原理、NMR仪、核磁嗡嗡声谱、检测法技巧四一些。一酶联免疫法概述概述中可以提供了根本一酶联免疫法概述基本传统模式和相一酶联免疫法概述基本传统模式的供试品水溶液光催化原理技巧、检测法技巧和计算出来表格函数，并大概例举了可以特别注意的实验英文参数表的如何设置及系统优化大型项目。

内容

USP现行版<761>、<1761>

EP 10.8版2.2.33

JP 18版2.21

中国药典2020版0441

引言

简介、原理、适用范围

简介、原理

核磁仪器确认

DQ、IQ、PQ，系统适用性测试、确证测试

定义

共振、信号、波谱、模式、峰、线、跃迁

设备

磁体、探头(样品旋转、核磁共振管 )、控制台和计算机，仪器准备(磁体与场、探头调谐和匹配)

仪器组成(磁体、探头、控制台和计算机)、证明仪器正确工作的测试方法

FT-NMR波谱仪、连续波核磁共振(CW-NMR)波谱仪类型

仪器组成、仪器输出谱图的过程

测定方法

溶剂选择、样品处理

测定程序、样品处理

氢谱和碳谱的实验技术

溶剂选择、样品处理、样品检测

定性和定量分析

定性应用、定量应用(相对定量、绝对定量、外部校准、进一步的校准注意事项、一般程序、计量溯源性和标准物质的选择、样品制备、数据采集、数据处理、数据分析 )

定性分析、定量分析(内标法、规范化过程 )

定性和定量分析
•定性分析
•定量分析(绝对定量模式、相对定量模式)

采集参数

光谱宽度、停留时间、数据点数、采集时间、扫描次数、射频、接收器增益和脉冲宽度，后脉冲延迟，重复延迟

参数(脉冲宽度、死时间、采集时间、重复时间、接受增益 )

记录仪器和测定条件

采集后数据处理

增加信噪比或光谱分辨率、零填充、傅里叶变换定相、基线校正、采峰、积分、高级处理解

为定量目的优化采集和处理参数(数字分辨率、信噪比、整合区域、动态范围 )

NMR分析方法的验证和确认

生命周期方法的分析方法验证
•ATP
•第一阶段一方法设计 (分析方法开发、QRMMODR、复制策略、分析控制策略 )
•第二阶段一APPQ(APPQ程序、测量不确定度APPQ结果和文档)
•第三阶段一CPPV (日常监测、分析方法的变更)传统分析方法验证(准确度、精密度、专属性、工作范围、定量限、耐用性、溶液稳定性 )、分析方法确认

溶液核磁共振应用

结构解析和表征(示例 )、鉴别(示例)、定量(实验设计、样品制备、1D qNMR、2D qNMR )

使用化学位移、谱峰多重性和相对强度进行鉴别，使用标准品进行鉴别

SSNMR

MAS、高功率去耦和CP三种技术和应用

台式核磁共振仪

台式时域NMR仪、台式频域NMR仪、台式核磁共振应用

03 定量核磁方法开发思路

氘代试剂

▲ 待测物及内标物在相应气代微生物培养基中压根融解;▲ 关注公众号待测物类别，不与气代微生物培养基会出现现象;▲ 必备时需加入重水或TFA移除水峰电磁波辐射。

内标物的选择

▲ 内标物的选用由待测物出峰情况发生明确;▲ 内标物一定量峰与待测物出峰不重重叠叠;▲ 青睐内标物理学基本特征，不与待测物反應▲ 内标物打样定制材质稳定性高，按量峰峰型简洁明了

定量峰的选择

▲ 化学发光法峰与其它信号灯峰基线剥离 ;▲ 定量分析峰彼此紧挨，峰型将近，避开基线介绍的不干扰;▲ 不选活泼开朗区警报峰看作一定量峰;▲ 以便避开通信卫星峰的干涉。

样品的前处理

▲ 为以减少称取误差度食用精密五金度不高的定量分析杆秤称取，时称取量在10mg以内;▲ 如样件可爱氢较多，是可以滴入重水、氘代甲醇等微生物培养基彻底清除可爱氢;▲ 样机齐全水解是必须的。

采集参数设置

▲ 扫锚数次:确保一定量峰的信噪比足够;▲ 弛豫延时:提高连续阅读时4g信号就可以充分弛豫，一样为5倍之内的T1;四角形;▲ 单脉冲增进:O1P应在待测物和内标物数据信息速率相互之间，缩短偏共鸣相互作用

实验数据处理

▲ 人工机械积分兑换查询应该较重新积分兑换查询正确;▲ 预防小行星峰及其基线下渠道杂峰的打扰;▲ 重要时对基线、峰相位采取娇正，使峰型呈对称，下降集分确定误差;▲ 内标物和待测物的定量分析峰积分系统应相对比较快要。

误差分析

▲ 待测物和内标物按量峰死机贫富差距过大;▲ 秤量误差率，建议保持试品秤量值不低于电子分析天平超小秤量值的两倍综上所述;▲ 实验室设备参数设制的的决定，如震动偏斜、AQ设制不合理RG值设制过小等造的的决定。

交付验收

▲ 开具发票对应复验统计;▲ 如果有要有检样应该再利用解决。

04 东盟体育的设备技术和服务

东盟体育核磁介绍网络平台有更强非常成熟的介绍机器、删改合法合规的合格品加测介绍做工作流程、从目的化学物质的光催化原理到判定（的结构验收）再到定量分析赋值（钙镁离子COA）的好几条龙安全服务。探讨导致符合东盟体育注册会员网上申报探讨追求，同一更好地匹配合作方完毕审计师及药品监督管理部门乃至每一位员工的实地检查做工作。

东盟体育
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